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高效液相色谱法串联质谱测定 水中沙星类抗生素

2018-08-18 14:24编辑:qdkasite.com人气:


沙星类(Quinones,QNs)抗生素(图-1)是一类人工合成的新型杀菌性抗菌药物,具有抗菌谱广、抗菌活性强、与其他抗菌药物无交叉耐药性以及毒副作用小、价格低廉等特点,被大量用于治疗和预防水生动物疾病及促生长。但研究表明,所使用的抗生素仅20%~30%被鱼类吸收,大部分进入环境中,而这部分抗生素再次进入食物链,可能导致养殖环境中病菌耐药性的产生,导致二次污染。这不仅影响到水产养殖业的健康发展,而且还威胁着生态环境的安全。水样中残留喹诺酮类抗生素,通过饮用进入人体,可能对人体肝脏功能造成严重损伤。因此,建立水环境中这类药物的检测方法尤为重要。目前,喹诺酮类药物残留检测方法,主要包括HPLC-UV、HPLC-FD、HPLC-DVD、LC-MS/MS、LC-ESI-MS/MS,另外还有荧光光谱法、毛细管电泳法和酶联免疫法等。

高效液相色谱法串联质谱测定 水中沙星类抗生素

图-1. 16种沙星类抗生素的结构式


本实验选择MCX阳离子交换柱进行富集、净化,超高压液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)联用技术检测,建立了环境水样中高灵敏的分析方法,该方法有望应用于水产养殖中。

关键字:全自动固相萃取;高效液相色谱-串联质谱;抗生素

2.仪器、试剂以及耗材

Reeko Fotector Plus全自动固相萃取仪(睿科)

MCX 固相萃取柱(Oasis,200 mg/6 mL)

高效液相色谱:(HPLC)Agilent 1260,质谱检测器(MS)Agilent 6410

氮气吹干装置:Reeko AutoEVA-60全自动平行浓缩仪

甲醇,乙腈(TEDIA 色谱纯);甲酸,氨水(优级纯)

3.样品制备与净化

3.1 固相萃取净化条件

全自动固相萃取仪   睿科Fotector Plus 60位  
固相萃取柱   MCX(Waters,200 mg/6 mL)  
活化   甲醇  
淋洗   pH=4.0 的甲酸水溶液  
洗脱   5%的氨水甲醇溶液  

3.2 富集净化

依次用甲醇(10mL)和水(10mL)以5.0mL/min的速率活化/平衡和淋洗固相萃取柱,备用。取纯净水样200mL, 幸运飞艇,如为加标样品,请加入标准品(100 μL,100 ppb),加入EDTA-MCIlvaine缓冲溶剂(50mL,0.1 mol/L)调节水环境的pH为4,以5mL/min的速率经固相萃取小柱富集后;用甲酸水溶液(pH=4.0)10 mL以10 mL/min速率淋洗;气推后用10 mL的5%氨水甲醇以1.0mL/min的速率洗脱。收集的样品在25 ℃,5 psi条件下浓缩至近干,流动相乙腈-水溶液(10:90,v/v,0.1 %甲酸)定容至1.0mL,供LC/MS-MS分析。全自动固相萃取方法见图-2。

高效液相色谱法串联质谱测定 水中沙星类抗生素

图-2. Fotector Plus水中沙星抗生素固相萃取方法


4.液质检测条件

4.1 色谱柱条件

高效液相色谱法串联质谱测定 水中沙星类抗生素

4.2 MRM参数

表-1. 16种抗生素的串联质谱检测参数


高效液相色谱法串联质谱测定 水中沙星类抗生素

4.3 16种沙星类抗生素的保留时间谱图

高效液相色谱法串联质谱测定 水中沙星类抗生素

5.样品测试

5.1基质效应验证

取纯净水样,按照上述的样品处理步骤后,氮吹至近干,加入标准使用液(1ppm,20 μL),定容成1mL,供LC/MS-MS检测。如果基质加标浓度准确,则可以直接用标准曲线对样品进行定量;如果不准确,请使用含有基质的工作曲线进行定量。

(来源:中国仪器网)

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